H&E folt - H&E stain

A retina (a szem része ) hematoxylinnel és eozinnal festett, a sejtmagok kék-lila színűek, az extracelluláris anyag rózsaszínű.

Hematoxilin-eozin festés ( vagy hematoxilin és eozin festés vagy hematoxilin-eozin festés ; gyakran rövidítve H & E festés , vagy HE ) az egyik fő szövet foltok használt szövettani . Ez a leggyakrabban használt folt az orvosi diagnosztikában, és gyakran az aranyszabvány . Például, amikor egy patológus néz ki egy biopszia egy gyanúsított rák , a szövettani metszetben valószínűleg festettük H & E.

A H&E két szövettani folt: a hematoxilin és az eozin kombinációja . A hematoxilin liláskékre festeti a sejtmagokat , az eozin pedig rózsaszínre festeti az extracelluláris mátrixot és a citoplazmát , más struktúrák pedig különböző árnyalatokat, árnyalatokat és e színek kombinációját veszik fel. Ezért a patológus könnyen meg tudja különböztetni a sejt nukleáris és citoplazmatikus részeit, emellett a foltból származó általános színminták a sejtek általános elrendezését és eloszlását mutatják, és általános áttekintést nyújtanak egy szövetminta szerkezetéről. Így alakfelismerés, mind szakértői emberek maguk és a szoftver, amely elősegíti e szakértők (a digitális patológia ) előírja, szövettani információkat.

Ezt a foltkombinációt először 1876 -ban vezette be A. Wissowzky.

Felhasználások

A H&E festési eljárás részben a szövettan fő foltja, mivel gyorsan elvégezhető, nem drága, és a szöveteket úgy festi meg, hogy jelentős mennyiségű mikroszkopikus anatómiát fedez fel, és széles körben diagnosztizálható szövettani állapotok. A H&E festés eredményei nem túlzottan függenek a szövet rögzítésére használt vegyi anyagtól vagy a laboratóriumi protokoll enyhe következetlenségeitől, és ezek a tényezők hozzájárulnak a szövettan rutinszerű használatához.

A H&E festés nem mindig biztosít elegendő kontrasztot az összes szövet, sejtstruktúra vagy a vegyi anyagok eloszlásának megkülönböztetéséhez, és ezekben az esetekben specifikusabb festéseket és módszereket alkalmaznak.

Alkalmazás módja

A tárgylemezek eltávolítása a hematoxilin -folt fürdőjéből.

A H&E eljárásban használt hematoxilin -oldatok (készítmény) elkészítésének számos módja van, emellett számos laboratóriumi protokoll létezik a H&E festett tárgylemezek előállítására, amelyek közül néhány egy adott laboratóriumra jellemző. Bár nincs szabványos eljárás, a megegyezés szerinti eredmények meglehetősen konzisztensek, mivel a sejtmagok kék színűek, a citoplazma és az extracelluláris mátrix rózsaszínűek. A szövettani laboratóriumok egy adott patológus számára is módosíthatják a festés mennyiségét vagy típusát.

Miután a szöveteket összegyűjtötték (gyakran biopsziák formájában ) és rögzítették, jellemzően dehidratálják és olvadt paraffinviaszba ágyazzák , a kapott blokkot mikrotómra rögzítik és vékony szeletekre vágják. A szeleteket mikroszkóp tárgylemezekre rögzítik, ekkor a viaszt eltávolítják oldószerrel, és a lemezekre rögzített szövetszeleteket újrahidratálják, és készen állnak a festésre. Alternatív megoldásként a H&E folt a leggyakrabban használt festék a Mohs -sebészetben , amelyben a szöveteket jellemzően lefagyasztják, kriosztátra vágják (a fagyasztott szövetet vágó mikrotóma), alkoholba rögzítik, majd megfestik.

A H & E festést a módszer magában foglalja alkalmazását hematoxilin keverve egy fémsót, vagy pác , gyakran követi a öblítés egy gyenge sav oldattal, hogy eltávolítsuk a felesleges festés ( differenciálódás ), majd kékre futtatás az enyhén lúgos vízben. Alkalmazása után hematoxilin, a szövetet ellenfestjük eozinnal (leggyakrabban eozin Y ).

Eredmények

A hematoxilin elsősorban a sejtek magjait kékre vagy sötétlilára színezi , néhány más szövet mellett, mint például a keratohyalin- granulátum és a meszes anyag. Az eozin a rózsaszín öt árnyalatában megfesti a citoplazmát és néhány más struktúrát, beleértve az extracelluláris mátrixot, például a kollagént . Az eozinofil (eozinnal festett anyagok) szerkezetek általában intracelluláris vagy extracelluláris fehérjékből állnak . A Lewy -testek és a Mallory -testek az eozinofil szerkezetek példái. A citoplazma nagy része eozinofil és rózsaszínűvé válik. A vörösvértestek intenzíven vörösre festődnek.

Hatásmód

Bár a hematein , a hematoxylin oxidált formája, az aktív színezőanyag (ha marószerrel kombinálják), a foltot továbbra is hematoxylinnek nevezik . A hematoxilint, ha marószerrel (leggyakrabban alumínium timsóval ) kombinálják, gyakran „bázisos, pozitív töltésű vagy kationos festéknek " hasonlítanak . Az eozin anionos (negatív töltésű) és savas folt. A sejtmagok hemalummal (alumíniumionok és hematein kombinációja) történő festése általában a festék-fém komplex DNS-hez való kötődésének köszönhető, de a nukleáris festés a DNS-szöveti metszetekből történő kivonása után is elérhető. A mechanizmus eltér a bázikus (kationos) festékekkel, például a tioninnal vagy a toluidinkékkel végzett nukleáris festéstől . A bázikus festékekkel való festés csak a hemalumnál kevésbé savas oldatokból történik, és ezt megelőzi a nukleinsavak előzetes kémiai vagy enzimatikus extrakciója. Bizonyíték van arra, hogy az alumíniumot és a hemateint összetartóhoz hasonló koordináta kötések kötik a hemalum komplexet a DNS-hez és a nukleáris kromatin fehérjék karboxicsoportjaihoz .

A struktúráknak nem kell savasnak vagy bázikusnak lenniük ahhoz, hogy bazofil és eozinofil nevűek legyenek; a terminológia a celluláris komponensek festékekhez való affinitásán alapul. Más színek, például sárga és barna is jelen lehetnek a mintában; belső pigmentek, például melanin okozzák . A bazális lamina meg kell megfesteni PAS festés vagy valamilyen ezüst foltok , ha van, hogy jól látható legyen. A retikuláris szálak ezüstfoltot is igényelnek. A hidrofób szerkezetek is tiszták maradnak; ezek általában zsírokban gazdagok, pl. zsírsejtek , mielin a neuron axonjai körül és Golgi készülék membránjai.

Példák H&E festett szövetekre

Hivatkozások

További irodalom

• Kiernan JA (2008) Szövettani és hisztokémiai módszerek: elmélet és gyakorlat. 4. kiadás. Bloxham, Egyesült Királyság: Scion.
• Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Nuclear foltok oldható metachrome mordant tó festékekkel. A kémiai végcsoport blokkoló reakciók hatása és a savcsoportok mesterséges bevitele a szövetekbe. Hisztokémia 49: 23–35.
• Llewellyn BD (2009) Nukleáris festés alum-hematoxylinnel. Biotechnológia. Histochem. 84: 159–177.
• Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) A jelenlegi kémiai koncepciók alkalmazása fém -haematein és -brazilein foltokra. Hisztokémia 85: 353–364.

Külső linkek

• SIGMA-ALDRICH H&E Információs Alapozó

Jegyzőkönyv

• Rutin Mayer hematoxilin- és eozinfoltja (H&E)
• Hematoxilin és eozin (H&E) festési protokoll
• Rosen Lab, Molekuláris és Sejtbiológiai Tanszék, Baylor College of Medicine) Lépésről lépésre protokoll