Mikrobiológiai kultúra - Microbiological culture
A mikrobiológiai tenyészet vagy mikrobiális tenyészet a mikrobiális organizmusok szaporodásának módszere azáltal, hogy ellenőrzött laboratóriumi körülmények között előre meghatározott táptalajban hagyják őket szaporodni . A mikrobiális kultúrák megalapozó és alapvető diagnosztikai módszerek, amelyeket a molekuláris biológia kutatási eszközeként alkalmaznak .
Mikrobiális tenyészetekkel meghatározzuk az organizmus típusát, bőségét a vizsgált mintában vagy mindkettőt. Ez a mikrobiológia egyik elsődleges diagnosztikai módszere, és eszközként használják a fertőző betegség okának meghatározásához azáltal, hogy a hatóanyagot előre meghatározott közegben szaporítják. Például egy toroktenyészetet úgy veszünk fel, hogy a torok hátsó részén található szövetbélést kaparjuk, és a mintát egy táptalajba foltozzuk, hogy megvizsgálhassuk a káros mikroorganizmusokat, például a Streptococcus pyogenes-t , amely a strep torok kórokozója. Ezenkívül a tenyészet kifejezést általában informálisan használják, hogy a laboratóriumban egy bizonyos típusú mikroorganizmust "szelektíven növesztessenek".
Gyakran elengedhetetlen a tiszta mikroorganizmus-kultúra izolálása. A tiszta (vagy axenikus ) tenyészet sejtek vagy többsejtű szervezetek populációja, amely más fajok vagy típusok hiányában növekszik . A tiszta tenyészet származhat egyetlen sejtből vagy egyetlen organizmusból, ebben az esetben a sejtek egymás genetikai klónjai . A mikrobiális tenyészet gélesítése céljából agarózgél- táptalajt ( agar ) használunk. Az agar egy hínárból nyert kocsonyás anyag . Az agar olcsó helyettesítője a guargumi , amely felhasználható a termofilek elkülönítésére és fenntartására .
Baktériumtenyészet
Többféle baktériumtenyésztési módszer létezik, amelyeket a tenyésztett szer és a későbbi felhasználás alapján választanak ki.
Húsleves kultúrák
A baktériumtenyésztés egyik módszere a folyékony tenyészet, amelyben a kívánt baktériumokat egy függőleges lombikban folyékony tápközegben, például Luria Broth -ban szuszpendálják . Ez lehetővé teszi egy tudós számára, hogy nagy mennyiségű baktériumot neveljen fel a downstream különböző alkalmazásokhoz.
A folyékony tenyészetek ideálisak egy olyan antimikrobiális vizsgálat előállításához, amelyben a kísérletező folyékony húslevest baktériumokkal olt be, és egy éjszakán át hagyja növekedni (rázót használhatnak az egyenletes növekedéshez). Ezután a minta alikvot részét vették egy adott gyógyszer vagy fehérje ( antimikrobiális peptidek ) antimikrobiális aktivitásának tesztelésére .
Alternatív megoldásként a mikrobiológus statikus folyékony tenyészetek felhasználása mellett dönthet. Ezeket a tenyészeteket nem rázzák meg, és oxigéngradienssel látják el a mikrobákat.
Agar lemezek
A mikrobiológiai tenyészetek különböző méretű petri-csészékben nevelhetők , amelyek vékony agar-alapú táptalajréteggel rendelkeznek. Miután a petri-csészében lévő tenyészközeget beoltjuk a kívánt baktériumokkal, a lemezeket az optimális hőmérsékleten inkubáljuk a kiválasztott baktériumok szaporodásához (például általában 37 Celsius-foknál, vagy az emberi test hőmérsékletén , az emberből származó tenyészeteknél). állatok vagy alacsonyabbak környezeti kultúrák esetében). Miután elérte a kívánt növekedési szintet, az agarlemezeket fejjel lefelé, hűtőszekrényben hosszabb ideig tárolhatjuk, hogy a baktériumok megmaradjanak a jövőbeni kísérletekhez.
Különféle adalékok adhatók az agarhoz, mielőtt egy tányérba öntik és hagyják megszilárdulni. Bizonyos típusú baktériumok csak bizonyos adalékanyagok jelenlétében növekedhetnek. Ez akkor is felhasználható, ha olyan baktérium törzseket hoznak létre, amelyek antibiotikum-rezisztencia gént tartalmaznak . Amikor a kiválasztott antibiotikumot hozzáadják az agarhoz, csak a rezisztenciát okozó gén inzertet tartalmazó baktériumsejtek képesek növekedni. Ez lehetővé teszi a kutató számára, hogy csak azokat a telepeket válassza ki, amelyek sikeresen átalakultak.
Agar alapú pálcikák
Az agarlemezek miniatürizált változata, amely a pálcika formátumokra van megvalósítva, pl. Dip Slide , digitális Dipstick mutatják potenciálisan felhasználható a point-of-care for diagnózis célra. Előnyeik vannak az agarlemezekkel szemben, mivel költséghatékonyak, és működésükhöz nincs szükség szakértelemre vagy laboratóriumi környezetre, amelyek lehetővé teszik az ápolás helyén történő alkalmazást.
Stab kultúrák
A stab tenyészetek hasonlóak az agarlemezekhez, de szilárd agarral képződnek egy kémcsőben. A baktériumokat oltótűvel vagy pipetta hegyével vezetik be, amelyet az agar közepére szúrnak . A kilyukadt területen baktériumok nőnek. A stábkultúrákat leggyakrabban a kultúrák rövid távú tárolására vagy szállítására használják.
Kulturális gyűjtemények
A mikrobiológiai kultúragyűjtemények a standard referencia mikroorganizmusok , sejtvonalak és egyéb mikrobiológiai szisztematikai kutatások céljára szolgáló életképes kultúrák megszerzésére, hitelesítésére, előállítására, megőrzésére, katalogizálására és terjesztésére koncentrálnak . A kultúragyűjtemény a típusú törzsek tárháza is .
Gyűjtemény betűszava | Név | Elhelyezkedés |
---|---|---|
ATCC | Amerikai típusú kultúragyűjtemény | Manassas , Virginia |
BCCM | Belga koordinált mikroorganizmus-gyűjtemények | Decentralizált koordinációs egység Brüsszelben , Belgiumban |
CCUG | Kulturális Gyűjtemény Göteborgi Egyetem | Göteborg, Svédország |
CECT | Colección Española de Cultivos Tipo | Valencia, Spanyolország |
CIP | Collection d'Institut Pasteur | Párizs , Franciaország |
DSMZ | Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen | Braunschweig , Németország |
ICMP | Növényekből származó mikroorganizmusok nemzetközi gyűjteménye | Auckland , Új-Zéland |
JCM | Japán mikroorganizmusok gyűjteménye | Tsukuba, Ibaraki , Japán |
NCTC | Típusú kultúrák nemzeti gyűjteménye | Közegészségügy Anglia , London , Egyesült Királyság |
NCIMB | Ipari, élelmiszeripari és tengeri baktériumok nemzeti gyűjteménye | Aberdeen , Skócia |
Termofil mikroorganizmusok szilárd lemez tenyésztése
Termofil mikroorganizmusok, például Bacillus acidocaldarius, Bacillus stearothermophilus, Thermus aquaticus és Thermus thermophilus stb. Szilárd lemezkultúráin 50–70 ° C hőmérsékleten növekszik, az alacsony acilszintű tisztított gellángumi az agarhoz képest előnyös gélképző szer a fenti termofil baktériumok számlálása vagy izolálása vagy mindkettő.
Vírus- és fágkultúra
A vírus- vagy fágtenyészetek olyan gazdasejteket igényelnek, amelyekben a vírus vagy a fág szaporodik. A bakteriofágok esetében a tenyészeteket baktériumsejtek fertőzésével tenyésztik. Ezután a fágot el lehet különíteni a kapott lepedékektől egy tányéron lévő baktériumok gyepében. A vírustenyészeteket a megfelelő eukarióta gazdasejtekből nyerik. A csíklemezes módszer a mikrobiális populáció fizikai elválasztásának egyik módja, és úgy történik, hogy az oltott anyagot oltóhurokkal előre és hátra terjesztjük a szilárd agarlemezre. Inkubáláskor telepek keletkeznek, és egyetlen sejtet izolálnak a biomasszából. Miután egy mikroorganizmust elkülönítettek a tiszta kultúrában, életképes állapotban kell megőrizni a további vizsgálatok és felhasználás céljából. A törzskultúrákat fenn kell tartani oly módon, hogy ne veszítsék el biológiai, immunológiai és kulturális jellegüket.
Eukarióta sejtkultúra
A tiszta kultúrák izolálása
Az egysejtű eukarióták, például az élesztő esetében a tiszta tenyészetek izolálása ugyanazokat a technikákat alkalmazza, mint a baktériumtenyészetek esetében. A többsejtű szervezetek tiszta kultúráit gyakran könnyebben izolálhatjuk, ha egyetlen egyedet választunk ki a tenyészet megindításához. Ez egy hasznos technika például a gombák , a többsejtű algák és a kis metazoa tiszta tenyésztésére .
A tiszta tenyésztési technikák fejlesztése döntő fontosságú a szóban forgó minta megfigyeléséhez. A legelterjedtebb módszer az egyes sejtek izolálására és tiszta tenyészet előállítására egy csíklemez előállítása. A széria lemez módszer egy módja annak, hogy fizikailag elkülönítse a mikrobiális populáció, és végzi terjed a innokulátumot oda-vissza egy oltókaccsal a szilárd anyag felett agarlemez . Inkubáláskor telepek keletkeznek, és egyetlen sejtet izolálnak a biomasszából. Miután egy mikroorganizmust izoláltunk a tiszta kultúrában, életképes állapotban kell megőrizni a további tanulmányok és felhasználás céljából. A törzskultúrákat fenn kell tartani oly módon, hogy ne veszítsék el biológiai, immunológiai és kulturális jellegüket.
Lásd még
- Telepképző egység
- Vérkultúra
- Mikrobiális sötét anyag
- Mikrobiális élelmiszerkultúrák
- Kultúrák szűrése
- Köpetkultúra
- Szinkron kultúra
- Gellángumi
Hivatkozások
Külső linkek
- EFFCA - Európai Élelmiszer- és Takarmánykultúrák Szövetsége. Információ a mikrobakultúrák előállításáról és felhasználásáról, valamint a jogszabályi szempontokról.