Multiplex polimeráz láncreakció - Multiplex polymerase chain reaction
A multiplex polimeráz láncreakció ( Multiplex PCR ) a polimeráz láncreakció használatát jelenti, amely egyszerre több különböző DNS -szekvencia amplifikálására szolgál (mintha sok különálló PCR -reakciót hajtana végre egy reakcióban). Ez a folyamat felerősíti a DNS-t a mintákban több láncindító és egy hőközvetített DNS-polimeráz segítségével egy termikus ciklusban . Az összes primerpár primer kialakítását úgy kell optimalizálni, hogy a PCR során minden primerpár ugyanazon hőkezelési hőmérsékleten tudjon működni.
A multiplex-PCR-t először 1988-ban írták le a dystrophin gén delécióinak kimutatására . A szteroid -szulfatáz génnel is használták . 2008-ban multiplex-PCR-t használtak a mikroszatellitek és az SNP-k elemzésére . 2020-ban RT-PCR multiplex vizsgálatokat terveztek, amelyek egyesítették a Betegségek és Ellenőrzési Központ több géncélját egyetlen reakcióban, hogy növeljék a SARS-CoV-2 diagnosztika molekuláris tesztelhetőségét és teljesítményét .
A Multiplex-PCR több primer készletből áll egyetlen PCR keverékben, hogy különböző méretű, különböző DNS-szekvenciákra jellemző amplikonokat állítson elő . Ha egyszerre több szekvenciát céloz meg, egyetlen tesztfuttatás során további információk nyerhetők, amelyek egyébként a reagensek többszörösét és több időt igényelnének a végrehajtáshoz. Az egyes alapozókészülékek izzítási hőmérsékleteit úgy kell optimalizálni, hogy egyetlen reakcióban megfelelően működjenek, és az amplikonméreteknek, azaz az alappár hosszuknak elég eltérőnek kell lenniük ahhoz, hogy gél -elektroforézissel láthatóvá váljanak . Alternatív megoldásként, ha az amplikonméretek átfedik egymást, a különböző amplikonok differenciálhatók és megjeleníthetők különböző színű fluoreszcens festékekkel festett primerek segítségével. Kereskedelmi multiplexelő készletek PCR -hez állnak rendelkezésre, és számos igazságügyi laboratórium használja őket a leromlott DNS -minták amplifikálására.
Alkalmazások
A multiplex PCR néhány alkalmazása a következő:
- Kórokozó azonosítása
- Nagy teljesítményű SNP genotipizálás
- Mutációelemzés
- Géntörlés elemzése
- Sablon mennyiségi meghatározása
- Kapcsolat elemzése
- RNS észlelés
- Törvényszéki tanulmányok
- Diéta elemzése