Hemocitométer - Hemocytometer
A hemocitométer (vagy haemocitométer) egy számlálókamrás készülék, amelyet eredetileg terveztek és általában vérsejtek számlálására használnak .
A hemocitométert Louis-Charles Malassez találta fel, és egy vastag üveg mikroszkóp tárgylemezből áll, téglalap alakú bemélyedéssel, amely precíz térfogatú kamrát hoz létre. Ezt a kamrát vésett egy lézerrel maratott rács a merőleges vonalak. A készüléket gondosan úgy alakították ki, hogy a vonalakkal határolt terület ismert legyen, és a kamra mélysége is ismert. A rács meghatározott területének megfigyelésével tehát megszámolható a sejtek vagy részecskék száma egy adott folyadékmennyiségben, és ezáltal kiszámítható a sejtek koncentrációja a folyadékban. Egy jól használt hemocitométer a Neubauer számláló kamra.
Más típusú hemocitométereket különböző szabályokkal használnak különböző alkalmazásokhoz. Fuchs-Rosenthal ítéletek, amelyeket általában a gerincvelői folyadékok számlálására használnak, az élelmiszereken és élelmiszerek csomagolásán használt penészgombákhoz használt Howard Mould ítéletek, a McMaster Egg Slide ítélet a székletben található mikrobiális tojások számlálására, Nageotte Chamber döntése a fehér fehérvérsejtek alacsony szintjének számítására sejtcsökkentett vérlemezke-komponensek, Palmer Nanoplankton döntés a kisebb deszkák számolására. A Petroff-Hausser számlálót a továbbfejlesztett Neubauer-döntések alapján használják a baktériumok és a spermiumok számának meghatározására, és különböző kamramélységekkel kínálják. A hemocitométer Sedgwick-Rafter Cell döntését elsősorban ivóvíz mikroszkópos vizsgálatára tervezték.
Alapelvek
A továbbfejlesztett Neubauer -féle hemocitométer rácsos területe kilenc 1 x 1 mm (1 mm 2 ) négyzetből áll. Ezek három irányba vannak felosztva; 0,25 x 0,25 mm (0,0625 mm 2 ), 0,25 x 0,20 mm (0,05 mm 2 ) és 0,20 x 0,20 mm (0,04 mm 2 ). A központi négyzet további 0,05 x 0,05 mm (0,0025 mm 2 ) négyzetekre oszlik . A hemocitométer felemelt szélei 0,1 mm -re tartják a fedőlemezt a megjelölt rácsról, így minden négyzet meghatározott térfogatot kap (lásd a jobb oldali ábrát).
Méretek | Terület | Térfogat 0,1 mm mélységben |
---|---|---|
1 x 1 mm | 1 mm 2 | 100 nL |
0,25 x 0,25 mm | 0,0625 mm 2 | 6,25 nL |
0,25 x 0,20 mm | 0,05 mm 2 | 5 nL |
0,20 x 0,20 mm | 0,04 mm 2 | 4 nL |
0,05 x 0,05 mm | 0,0025 mm 2 | 0,25 nL |
Használat
A hemocitométer használatához először győződjön meg arról, hogy a számláló kamrához mellékelt speciális fedőlemez megfelelően van elhelyezve a számláló kamra felületén. Amikor a két üvegfelület megfelelően érintkezik, Newton gyűrűi figyelhetők meg. Ha igen, akkor a cellaszuszpenziót a fedőlemez szélére kell felhordani, hogy a kapilláris hatás révén az üregbe szívja, amely teljesen kitölti a kamrát a mintával. A kamrában lévő sejtek számát mikroszkóppal végzett közvetlen számlálással lehet meghatározni , és a vizuálisan megkülönböztethető sejteket differenciálisan meg lehet számolni. A kamrában lévő sejtek számát használjuk a mintákból származó keverékben lévő sejtek koncentrációjának vagy sűrűségének kiszámításához . Ez a kamrában lévő cellák száma osztva a kamra térfogatával, ami kezdettől fogva ismert, figyelembe véve az esetleges hígításokat és a számlálási parancsikonokat:
ahol a hígított minta térfogata (hígítás után) osztva a mintában lévő eredeti keverék térfogatával (hígítás előtt) a hígítási tényező . Például, ha az eredeti keverék térfogata 20μL volt, és egyszer hígították (20μL hígítószer hozzáadásával), akkor a zárójelben lévő második kifejezés 40μL/20μL. A számított négyzetek térfogata a táblázatban látható, a méret függvényében (lásd a jobb oldali ábrát). A megszámolt sejtek száma az összes kamra négyzetein számolt összes sejtek összege. A számított cellák aránya érvényes, ha egy meghatározott négyzeten belül nem minden belső négyzetet számolnak (azaz ha a saroknégyzet 20 -ból csak 4 -et számolunk, akkor ez a kifejezés 0,2 lesz).
A legtöbb alkalmazáshoz csak a négy nagy saroknégyzetet használják. A felső és bal sorban lévő vagy azt érintő cellákat a rendszer számolja, de a jobb vagy alsó sorokat érintő vagy azokat érintő cellákat figyelmen kívül hagyja.
Követelmények
A mintavétel előtt az eredeti szuszpenziót alaposan fel kell keverni. Ez biztosítja, hogy a minta reprezentatív legyen, és ne csak az eredeti keverék adott régiójának műalkotása.
A keveréket a hígítandó sejtek számának megfelelően kell hígítani . Ha a minta nincs elég hígítva, a sejtek túlzsúfoltak és nehezen számolhatók. Ha túl híg, akkor a minta mérete nem elegendő ahhoz, hogy erős következtetéseket vonjunk le az eredeti keverék koncentrációjáról.
Ha redundáns tesztet végeznek egy második kamrán, az eredmények összehasonlíthatók. Ha a számlálási hiba kétszeresénél (számolás négyzetgyöke) eltérnek, akkor a minta vételének módja megbízhatatlan lehet (pl. Az eredeti keveréket nem keverik össze alaposan).
A számláló kamrát kapilláris mozdulatokkal kell feltölteni, miután a kamra fedelét (speciális fedőlap, hitelesített vastagságú és lapos) a helyére helyezték. Ezzel elkerülhető annak kockázata, hogy a sejtek leülepedjenek/tapadjanak az üveghez vagy valamilyen térfogathoz, hogy elpárologjanak, mielőtt a fedőlapot a tetejére helyezik, és ez a sejtkoncentráció túlbecsülését eredményezi. Az ülepítés kevésbé jelent problémát a baktériumokkal, de a párolgást, amely inkább az alacsony páratartalmú, légkondicionált laboratóriumokban fordul elő, még minimálisra kell csökkenteni.
Alkalmazások
- Vérképek : kóros vérsejtekkel rendelkező betegeknél, ahol az automatikus számlálók nem teljesítenek jól.
- A spermiumok számítanak
- Sejtkultúra: a sejtnövekedés időbeli altenyésztése vagy rögzítése során.
- Sörfőzés : az élesztő elkészítéséhez.
- A fitoplankton sejtek számlálása
- Sejtfeldolgozás a downstream elemzéshez: számos tesztben ( PCR , áramlási citometria ) pontos sejtszámra van szükség , míg néhány másnál nagy a sejtek életképessége.
- A sejtméret mérése: mikrográfban a valódi sejtméretre következtethetünk, ha a hemocitométer négyzet szélességére méretezzük, ami ismert.
Hivatkozások
Külső linkek
- Online gyakorlat - Az élesztőszám javult a Neubauer vagy a Thoma számláló kamrákban
- Hemocitométer számológép online